测试前应将所有的试剂恢复至室温（18～30℃）。
1. 从箔包中取出适用于每个待测样品的1个红色标记的混合微孔,另加适用于标准品的4红色标记的混合微孔，放在微孔架上。
2. 取同样数量的已包被抗体的微孔。把暂不使用的微孔放回到箔包中，并重新密封，以保护抗体。在带子的一端标上“1”，然后放到孔架上，将有标记的一端放在左边。不要在微孔的里面和底部写标记。
3. 在使用之前摇动试剂瓶，混合每种试剂。
4. 从兰色标签的瓶内吸取100μl轭合物加到每个红色标记的混合微孔内。弃去吸咀。
5. 每次使用新吸咀，吸取100μl控制标准溶液和样品液按下列顺序加到红色标记的混合微孔内：
0 5 15 50 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 第1条
S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 S19 S20 第2条
6. 用12道移液器吸入、排出3次使微孔内溶液彻底混合，吸取100μl加到相应的已包被抗体的微孔内，在平的表面上将板前后滑动确保充分混合10～20秒钟，不要溅出试剂，混合后于室温下（18～30℃）温育2分钟。弃去红色标记微孔。
7. 倒掉已包被抗体微孔内的溶液。在每个微孔内加满蒸馏水或去离子水，再吸出，如此重复5次，将板朝下，在吸水材料上拍击以去除所有的水滴。
8. 从绿色试剂瓶中倒出所需量的试剂到绿色试剂槽中。
9. 用12通道移液器和新吸咀，吸取100μl底物加到每个微孔内，在平的表面上将板前后滑动确保充分混合10～20秒钟。
10. 温育3分钟。倒掉试剂槽中剩余的底物并冲洗试剂槽。
11. 从红色试剂瓶中倒出所需量的试剂到红色试剂槽中。
12. 用12通通道移液器吸出过量的底物溶液，再吸取100μl红色终止液加到每个微孔内，在平的表面上将板前后滑动确保充分混合。弃去吸咀。
13. 用干净的布擦净板底，将板置于酶标仪(650nm滤光片)下读数。由于气泡会影响结果，应消除溶液中气泡。应在加入红色终止剂后20分钟内完成读数。
14. 用酶标仪或相当产品读数和计算结果。