测试前应将所有的试剂恢复至室温（18～30℃）。
1. 对于每个样品，从箔包中取1个红色标记的混合孔和5个红色的标准控制液的孔，放在孔架上。
2. 取同样数量的包被了抗体的孔。把暂不使用的孔放回到箔包中，并重新密封，以保护抗体。在带子的一端标上“1”，然后放到孔架上，将有标记的一端放在左边。不要在孔的里面和底部写标记。
3. 在使用之前摇动试剂瓶，混合每种试剂。
4. 从兰色标签的瓶内吸取100μl轭合物加到每个红色标记的混合孔内。
5. 每次使用新吸咀，吸取100μl标准液和样品液按下列顺序加到红色标记的混合孔内：
0 0.5 1 2 6 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 第1条
S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 S19 第2条
6．用12道移液器吸入、排出3次使孔内溶液彻底混合，吸取100μl加到相应的包被了抗体的孔内，在平的表面上将板前后滑动确保充分混合10～20秒钟，不要溅出试剂，混合后于室温下（18～30℃）放置5分钟。弃去红色标记孔。
7．倒掉包被了抗体孔内的溶液。在每个孔内加满蒸馏水或去离子水，再吸出，如此重复5次，将板朝下，在吸水材料上拍击以去除所有的水滴。
8．从绿色标签试剂瓶中倒出所需量的试剂到绿色试剂槽中。
9．用12道移液器和新吸咀，吸取100μl底物加到每个孔内，在平的表面上将板前后滑动确保充分混合10～20秒钟。
10．混合后放置5分钟。倒掉试剂槽中剩余的底物并冲洗试剂槽。
11．从红色试剂瓶中倒出所需量的试剂到红色试剂槽中。
12．去除12道移液器中多余的底物溶液，更换吸头咀，再吸取100μl红色终止液加到每个孔内，在平的表面上将板前后滑动确保充分混合。弃去吸咀。
13．用干布擦净板底，将板置于酶标仪的650nm滤光片下读数。由于气泡会影响结果，应削除溶液中气泡。应在加入红色终止剂后20分钟内完成读数。
14．用酶标仪或相当产品读数和计算结果。